用二氧化碳培养箱做细胞培养及冻存

  首先做实验所需仪器耗材如下：
    二氧化碳培养箱、液氮罐、超低温低温冰箱、电热恒温水浴锅、离心机等。

   培养皿、滴瓶、吸管、离心管、烧杯、量筒、三角瓶、培养瓶等

下面小编给大家说下简易的实验步骤

    将冻存细胞从液氮中取出后，在37℃电热恒温水浴锅内不断摇动促进其融化。移入15ml离心管中，加入10ml预热的DMEM*培养基，轻轻吹匀，离心2min，弃上清液。加入10ml DMEM培养基清洗，弃上清液。加入10ml DMEM*培养基，轻轻吹打，接种于10cm盘中，在含5%CO2的二氧化碳培养箱中培养。

     细胞密度达到80%~90%时．去培养基，10ml PBS清洗2次。加入3ml含0．25%EDTA的胰蛋白酶，放入二氧化碳培养箱3min。加人1ml DMEM*培养基终止胰酶消化，转移至15ml离心管。加入10ml PBS清洗细胞培养盘，转移至15ml离心管离心2min，弃上清液。再加入10ml PBS（经灭菌，保存于40℃）吸取10微升进行计数，按照1×105/盘接种，在含5%CO2的二氧化碳培养箱继续培养。

       加入1ml冻存液（90%血清，10%DMSO），放入冻存盒内，立即放入一80℃超低温冰箱内，过夜，第二天放入液氮中，可以保存至少两年，如不放入可以保存90天。