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免疫磁珠集菌方法

发表时间:2017-07-13  |  点击率:663

免疫磁珠集菌方法(IMS):
原理:用包被有O157:H7单克隆抗体的磁珠进行免疫磁性的分离方法。对待检标本先进行增菌,然后再和抗O157:H7的磁珠共同孵育,zui后将磁珠-细菌混合物悬浮后涂于CT-SMAC平板或科玛嘉O157:H7显色平板进行分离培养。

操作步骤:
1、 取下磁板,将编号的1.5ml的Eppendorf离心管,置入Dynal     MPC-M架上。

2、 轻柔混匀抗 E.coilO157免疫磁珠 (反复颠倒,直到管底沉淀完全消失),吸取抗E.coilO157免疫磁珠,置入每只编号的Eppendorf离心管20ul。

3、 取金标检测阳性的样品增菌培养物1ml,加入上述对应的Eppendorf离心管中。盖紧盖子。轻轻颠倒混匀。

4、置于Dynal  MX3旋转培养器上,室温下,旋转30分钟(如果没有旋转器,可人工旋转)。

5、将磁铁板插入Dynal  MPC-M架中,反复颠倒数次,将抗E.coilO157免疫磁珠吸附沉淀在Eppendorf离心管上。吸去上清(包括残留在管盖上的液体),并弃掉。

6、将磁铁板从Dynal  MPC-M架抽出。每只Eppendorf离心管中加入1mlPBS-Tween20(pH7.4),轻轻颠倒混匀,重新悬浮免疫磁珠。

7、重复5-6步骤。

8、重复5步骤。

9、用80-100 ul PBS-Tween20(pH7.4) 重新悬浮免疫磁珠细菌混合物。
PBS-Tween20(pH7.4)配方:
KH2PO4              0.2g
NaH2PO4 · 12H2O      2.9g
NaCL                 8.0g
KCL                  0.2g
Tween-20              0.5ml
加水至1000ml

 

 

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