用液晶显示生化培养箱培养神经元原代细胞

     神经元培养的原代细胞，是较难培养的一种细胞。关键就是大鼠年龄的选择，是胎鼠，新生鼠还是成年大鼠，理想的是胎鼠。今天喆图小编就从这个说起，用液晶显示生化培养箱培养大鼠海马神经元原代细胞的几种培养的方法。

     1.剖宫产取出胚胎，放在保存液中移至显微镜下操作取出胎脑，去掉小脑，从中线切开左右大脑半球。剥去软脑膜以及脉络丛血管。然后钝性分离海马，显微镜下用剪刀剪下海马即可

     2. 每个取出的海马组织都放置在含有4℃培养液的试管中。快速分离数个胎鼠海马后就可以做消化和细胞计数了。消化液用经典的胰蛋白酶于液晶显示生化培养箱中 37℃恒温 30分钟即可。然后吹打(1000ul tip 10-20次，2ml 灼烧拉伸的玻璃管，口径与200ul tip相当，吹打10-20次)到看不到组织为止。很多protocol建议此刻离心。消化后去上清，留1-2ml直接吹打，然后就可以直接细胞计数。

     3.神经元会长的很大，所以密度要低，50000/ml就可以了，100mm的plate, 5-7ml。培养液用无血清无抗生素加B27和N2的DMEM效果就很好。培养皿要用PDL和含血清以及抗生素的培养液预处理72小时。这样可以避免感染也让神经元容易附着和分化。每一周加1-2ml的新鲜培养液，于液晶显示生化培养箱中37℃恒温，2-3周即可成熟。

     4.染色检测：后就是标记蛋白检测，一般可用MAP2标记神经纤维，一些神经递质受体标记突触，NeuN标记神经元细胞核。

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