用恒温培养箱培养初代细胞

     今天喆图小编给大家讲讲初代培养或原代培养，是从供体获取组织后的培养。其蕞大优点是：组织和细胞刚刚离体，生物性状尚未发生很大的变化，具有二倍体遗传性状，在供体来源充分、生物条件稳定的情况下，在一定程度上能反映体内状态。
     合成培养基胰蛋白酶消化培养法，能把组织块分散成细胞团或单个细胞，便于细胞从培养液中摄取营养和排出代谢产物，细胞能较快地长成单层。本法尤适用于培养大量组织，细胞产量高；但用于经常性小量培养工作稍显繁琐，无菌操作不良时且易污染。
     首先讲讲实验方法：

     实验材料：试剂、试剂盒 Hanks、培养液、胰蛋白酶
     实验所需仪器、耗材：恒温水浴锅、吸管、平皿、培养瓶、恒温培养箱、烧杯、搅拌器、三角烧瓶、不锈钢筛、眼科剪、眼科镊、计数板、CO2培养箱等等。
      实验步骤：
     1. 准备：取各种已消毒的培养用品置于净化台面，紫外线消毒20 分钟；
     2. 布局：点燃煤气灯，安装吸管帽（应通过火焰）；

     3. 处理组织：把组织块置入烧杯中，用Hanks液漂洗2~3 次，去除血污；如怀疑组织可能污染，可先置于含有青链霉素的混合液中30~60 分钟；
     4. 剪切：用眼科剪把组织块切成2~3 毫米大小的块（用手术刀割亦可），以便于消化；加入比组织块总量多30~50 倍的胰蛋白酶液，然后一并倒入三角烧瓶中，结扎瓶口或塞以胶塞；
     5. 消化：或用恒温水浴锅，或置入37 ℃恒温培养箱中消化均可，消化中每隔20 分钟应摇动一次；消化时间依组织块的大小和组织的硬度而定；
     6. 分离：在消化过程中见消化液发混浊时，可用吸管吸出少许消化液在镜下观察，如组织已分散成细胞团或单个细胞，立即终止消化，随即通过适宜不锈钢筛，滤掉尚未充分消化开的组织块；低速离心消化液5 分钟，吸出上清，加入适量含有血清的培养液；
     7. 计数：用计数板计数，如细胞悬液细胞密度过大，再补加培养液调整后，分装入培养瓶中；对大多数细胞来说，pH 要求在7.2~7.4范围，培养液呈微红色，如颜色偏黄，说胆液体变酸，可用NaHCO3调整；
     8. 培养：置入36.5 ℃恒温培养箱中培养；如果用CO2培养箱培养，瓶口需用纱布棉塞或螺旋帽（松口）堵塞，纱布塞易生霉菌，每次换液时需更换新塞。
注意事项：
     9. 组织块、胰蛋白酶、培养液等易受紫外线伤害的物品，*在培养时再携入操作野；如预先置入，需用纸张覆盖，以免受射线影响；开始工作前先洗手、75%酒精擦拭手至肘部。

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