酿酒酵母感受态细胞的制备、转化

接下来喆图小编给大家讲讲酿酒酵母感受态细胞的制备方法：

（1）从YPD平板上挑取一个新鲜的酿酒酵母EBY100单克隆至10 ml YPD液体培养基，30℃，250 rpm 培养过夜。

（2）测定过夜培养物的OD600值为3.0~5.0之间。

（3）将10 ml YPD过夜培养物稀释至OD600值为0.2~0.4。

（4）在28~30℃恒温培养摇床中继续培养3~6 hr，使其OD600值达到0.6~1.0。

（5）于室温1500 g 离心5 min 收集酵母细胞，弃上清。

（6）用10 ml 洗液洗酵母细胞，随后于室温1500 g 离心5 min离 心收集细胞，弃上清。

（7）用1 ml TE/LiAc重悬酵母细胞，以每管50 μl 分装。

接下来是酿酒酵母细胞的转化

（1）取50 μl 感受态细胞，再加入待转质粒各2 μl，混匀。

（2）加入500 μl 转化用溶液（PEG/LiAc，二甲亚砜），弹击管壁混匀。

（3）30℃恒温培养摇床中恒温1 h，隔15min弹击管壁混匀。

（4）加入1毫升YPD培养液，30℃恒温培养摇床中培养1小时。

（5）3500 g 离心5 min ，留沉淀，弃上清。

（6）沉淀用150 μl TE重悬，涂相应的SD平板放置在37℃恒温培养箱中30-60min直到表面的液体都渗透到培养基里后，再倒置过来放入37℃恒温培养箱过夜。在被细菌污染的桌面上喷洒70%乙醇，擦干桌面，写实验报告。观察平板上长出的菌落克隆，以菌落之间能互相分开为好。注意白色菌斑。

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