糖化酶的制备

  糖化酶又称葡萄糖淀粉酶，其作用方式不像α-淀粉酶那样无作用次序,而是从底物链的非还原性末端开始,顺次切下一个个葡萄糖单位,遇到分支处的α-1,6糖苷键时,可将α-1,6糖苷键切开,然后继续作用α-1,4糖苷键,直到产物全部成为葡萄糖为止。但糖化酶对α-1,6糖苷键的作用速度远不及对α-1,4糖苷键的作用速度，因此水解支链淀粉多的淀粉时，需延长水解作用时间或添加部分支链淀粉酶。
  我国糖化酶的生产主要由黑曲霉优良菌种经深层发酵精制提炼而成。本实验利用黑曲霉具有多种活力较强酶系的特点，利用淀粉类物质为原料，获得制备淀粉水解糖所需的糖化酶。

一、实验材料

1. 菌种：黑曲霉（Aspergillus niger）

2. 仪器：洁净工作台、灭菌锅、恒温培养箱、高速冷冻离心机、高压灭菌锅

二、实验步骤

实验流程：保藏菌种®菌株活化及平板扩大培养®摇瓶培养

1.菌株活化及扩大培养

①制备PDA培养基：去皮马铃薯200g切成小块，加水约500mL，煮沸30min，然后用纱布过滤，滤液加蔗糖20g，琼脂20g。溶化后加水定容至1000mL，分装于250ml锥形瓶中，121℃灭菌20min，自然pH。

②接种：取灭菌后PDA培养基倒平板，冷却后，接种斜面保藏的黑曲霉菌种，28℃恒温培养3d。

2.摇瓶发酵培养

①发酵培养基的制备：

玉米粉培养基：玉米粉30g,米糠5g,麸皮5g,加水1000ml,拌匀至无干粉又无结团，分装于250 ml锥形瓶内，每瓶100ml, 自然pH，121℃灭菌20 min。

②接种与产酶培养:取培养72h的黑曲霉平板，用打孔器打孔制成菌片。每个锥形瓶中接种12片，放在恒温培养箱中28℃培养96 h。

3.离心

将摇床培养4d的黑曲霉发酵液4层纱布过滤后离心（10000r/min，10min）除菌体，所得上清液即为糖化酶粗酶液。