用帖壁法纯化巨噬细胞

1．用含20％～40％小牛血清的RPMI-1640培养液将巨噬细胞配成2×106～4×106/ml的浓度。以每平方厘米2×105～4×105个巨噬细胞的密度将细胞悬液接种到玻璃培养皿（瓶）或塑料培养皿（瓶）中。37℃5％CO2的饱和水汽二氧化碳培养箱中培养1小时或24小时。1小时培养节省时间但会丢失一些粘附力弱的巨噬细胞，而24小时可以得到较多的巨噬细胞。20％～40％的小牛血清可以减少B淋巴细胞的粘附。2．摇晃培养皿（瓶），悬浮未粘附细胞，吸出细胞悬液。用预温的Hanks液...

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羊水细胞培养

羊水中含有胎儿脱落的上皮细胞，可在体外培养用以分析胎儿染色体核型。目前国内外大都采用腹腔羊膜穿刺术，妊娠12-30周的羊水细胞均可培养成功。羊膜腔穿刺取羊水行染色体分析，最佳孕周为16周左右。因此时羊水增长快，羊水中细胞较多，细胞培养易于生长，而且不易损伤胎儿。国内多数选择的穿刺时间在妊娠的第16-30周。国外现已较多地采用妊娠早期的羊膜穿刺，但需在B超下定位及穿刺。羊水量按妊娠时间大致计算（1ml/w）。资料表明，穿刺病例的妊娠结局、分娩方式、胎儿的出生体重等与未穿刺无明显...

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靶细胞杀伤实验：LDH法

一、效应细胞的制备激惹5天后，于无菌条件下取出受鼠引流的腹股沟淋巴结，100目钢网研磨，调整细胞浓度为2×107.ml-1。台盼蓝色要求存活率95%。二、靶细胞的制备P815细胞株系DBA/2小鼠的肥大细胞瘤细胞株。连续传代培养，调整细胞浓度为2×105/ml或3.33×105/ml（加入α-Lyt2mAb时的靶细胞浓度），台盼蓝染色成活率95%。三、LDH释放法测定CTL的功能按表1加样于96孔培养板中，设3个复孔。混匀置二氧化碳培养箱中孵育4h。室温离心，用微量加样器每孔...

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研究T细胞产生的细胞因子的3种方法

1）研究细胞因子mRNA的方法绝大多数细胞因子mRNA在T细胞中只短暂存在，其存在的量与T细胞产生细胞因子的量也有很好的相关性。所以，在大多数情况下，细胞内mRNA的量可以反映细胞产生细胞因子的情况。检测细胞因子mRNA的试验主要有：竞争性聚合酶链反应、Northern印迹杂交、斑点杂交、逆转录聚合酶链反应、原位杂交。2）研究细胞因子的免疫检测法免疫检测法主要有放射免疫检测法、酶免疫测定法、免疫荧光测定法和免疫发光测定法等。3）研究细胞因子的生物学方法1．用含10％小牛血清的...

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噬神经元的腺病毒载体的构建

实验试剂人类胚胎肾（HEK）293T细胞腺病毒转移载体质粒腺病毒包装载体PLP1，pLP2（之前），PLP/VSVGDMEM培养基青霉素，链霉素-谷氨酰胺（100X）磷酸盐缓冲液PBS（-）胎牛血清凝聚胺实验设备10-cm的细胞培养皿50毫升锥形离心管Steriflip-GP过滤器（0.22微米）超离心管17.0mL5％二氧化碳培养箱荧光显微镜生物安全柜离心机实验材料2.5M氯化钙溶液：36.75克氯化钙，70毫升双蒸H2O，通过0.22μm滤膜过滤，体积调制100毫升...

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细胞介导细胞毒作用检测法：时间分辩荧光分析法

时间分辩荧光分析法1）铕荧光检测法标记靶细胞1．EuCl3的制备：称取58.08mgEu2O3，用少量1NHCl搅拌至溶解，再用1NNaOH调节pH至4.0。加双蒸水配成33～100mmol/L的保存液，4℃保存备用。2．用预冷的标记液将靶细胞浓度调整到5×106/ml，加50μl10mg/ml硫酸葡聚糖，置冰浴中20分钟，其间摇晃数次。3．加入30μl100mmol/LCaCl2溶液终止反应5分钟。4．用含2mmol/LCaCl2的RPMI-1640培养液洗涤细胞5次。用含...

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NAG检测法检测细胞生长

1．按MTT检测法培养细胞和用不同稀释度的细胞因子处理细胞。2．吸去培养液，用PBS洗涤两次（如为悬浮细胞，应在吸去上清液前先离心）。3．每孔加60μlNAG染液，在37℃5％CO2的饱和水汽二氧化碳培养箱中培养4小时。4．每孔加90μl终止液，混匀后置酶联检测仪上测定光密度（OD）值，检测波长402nm。以OD值对样品稀释度作图，比较标准曲线和待测样品曲线即可求得待测样品中细胞因子的含量。

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枣树对光照的要求

这个季节正是红枣成熟并且大量上市的季节。枣子的产量及品质如何与它的生长环境有着密切的关系。枣树在生长过程中不仅受到土壤水分、温度等因素的影响，同时对光照的要求也十分严格，下面内容通过光照培养箱研究枣树对光照的要求。通过光照培养箱研究得知，枣树喜光性很强，光照强度和日照长短将会直接影响到其光合作用，从而影响枣树的生长和结果，光照对生长结果的影响在生产中较为常见。密闭枣园的枣树，树势弱，枣头、二次枝、枣吊生长不良，无效枝多，内膛枯死枝多，产量低，品质差；边行、边株结果多，品质好。...

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